Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans / Detecção molecular de protozoários Apicomplexa em tecidos de Alouatta guariba clamitans

The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.(AU)

O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.(AU)

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans

ABSTRACT: The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.

RESUMO: O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.

Plasmodium infection and its association with biochemical and haematological parameters in free-living Alouatta guariba clamitans (Cabrera, 1940) (Primates: Atelidae) in Southern Brazil

BACKGROUND The influence of Plasmodium spp. infection in the health of Southern brown howler monkey, Alouatta guariba clamitans, the main reservoir of malaria in the Atlantic Forest, is still unknown. OBJECTIVES The aim of this study was to investigate the positivity rate of Plasmodium infection in free-living howler monkeys in an Atlantic Forest fragment in Joinville/SC and to associate the infection with clinical, morphometrical, haematological and biochemical alterations. METHODS Molecular diagnosis of Plasmodium infection in the captured monkeys was performed by Nested-polymerase chain reaction (PCR) (18S rRNA and coxI). Haematological and biochemical parameters were compared among infected and uninfected monkeys; clinical and morphometrical parameters were also compared. FINDINGS The positivity rate of Plasmodium infection was 70% among forty captured animals, the highest reported for neotropical primates. None statistical differences were detected in the clinical parameters, and morphometric measures comparing infected and uninfected groups. The main significant alteration was the higher alanine aminotransferase (ALT) levels in infected compared to uninfected monkeys. MAIN CONCLUSIONS Therefore, Plasmodium infection in howler monkeys may causes haematological/biochemical alterations which might suggest hepatic impairment. Moreover, infection must be monitored for the eco-epidemiological surveillance of malaria in the Atlantic Forest and during primate conservation program that involves the animal movement, such as translocations.

Avaliação ultrassonográfica e mensurações das glândulas adrenais em primatas não humanos neotropicais: mico-de-cheiro (Saimiri sciureus), macaco-da-noite (Aotus azarae infulatus) e bugio-ruivo (Alouatta guariba clamitans) / Adrenal glands measurements and ultrasound evaluation in nonhuman primates: squirrel monkey (Saimiri sciureus), owl monkey (Aotus azarae infulatus) and howler monkey (Alouatta guariba clamitans)

As glândulas adrenais possuem funções endócrinas relacionadas a múltiplas funções vitais, estando intimamente relacionadas à capacidade do animal em se adaptar ao estresse. O exame ultrassonográfico é o método diagnóstico de escolha para avaliação das glândulas em diferentes espécies. Considerando a escassa literatura, questiona-se se as doenças adrenais em primatas não humanos são incomuns ou subdiagnosticadas, havendo a hipótese desse fato ser determinado pela falta de parâmetros. Objetivou-se descrever as características ultrassonográficas das glândulas adrenais para três espécies de primatas não humanos mantidas em cativeiro: Saimiri sciureus (mico-de-cheiro), Aotus azarae infulatus (macaco-da-noite) e Alouatta guariba clamitans (bugio-ruivo). Conclui-se que é possível a identificação das glândulas adrenais por meio de exame ultrassonográfico, sendo que os padrões de referência foram estabelecidos com sucesso para as espécies em questão. Ressalta-se que a adequação de animais em ambientes estressantes é frequentemente acompanhada por uma hipertrofia das glândulas adrenais, portanto deve-se levar em consideração que as mensurações realizadas nesse estudo foram estabelecidas em animais de cativeiro...

The adrenal glands have endocrine functions related to multiple vital functions and are closely related to the animal's ability to adapt to stress. The ultrasound is the diagnostic method of choice for evaluation of glands in different species. Considering the scarce literature, one may question whether the adrenal disorders in nonhuman primates are uncommon or underdiagnosed, and a hypothesis exists that this fact is determined by the lack of parameters. The goal is to describe the sonographic features of the adrenal glands for three species of nonhuman primates kept in captivity: squirrel monkey (Saimiri sciureus), owl monkey (Aotus azarae infulatus) and howler monkey (Alouatta guariba clamitans). It is concluded that it is possible to identify the adrenal glands by ultrasound, and the reference standards have been established successfully for the species in question. It is noteworthy that the adaptation of animals in many stressful environments is often accompanied by a hypertrophy of the adrenal glands, so one should take into account that the measurements performed in this study were established in captive animals...

Comportamentos de hierarquia e dominância em grupos de bugios-ruivos, Alouatta guariba clamitans (Cabrera, 1940), em cativeiro / Hierarchy and dominance behaviors in brown howler monkey groups Alouatta guariba clamitans (Cabrera, 1940) in captivity

O estudo que segue foi realizado com dois grupos de bugios-ruivos (Alouatta guariba clamitans) em cativeiro, no Centro de Acolhimento de Primatas e Aves (PRIMAVES) com o objetivo de identificar comportamentos de hierarquia e dominância, através da quantificação e duração das condutas, comparando os dados obtidos com dados já descritos para o gênero Alouatta. Foram realizadas 172 horas de observação e a partir da quantificação das condutas catar (categoria social não-agonística), vocalizar (categoria social agonística), vigiar (categoria alerta) e comer (categoria alimentação). Ambos os grupos mostraram uma evidente dominância entre os indivíduos, com os machos juvenis apresentando certo grau de centralidade espacial, demonstrado através dos comportamentos de vocalização e vigiar. As fêmeas mostraram-se ativas nas funções de vigia e catação, evidenciando o seu importante papel na contribuição da estabilidade social, proporcionando ao grupo que vive em cativeiro uma relação apaziguadora entre os indivíduos.

This study was done with two groups of brown howler monkeys in captivity, at the Centro de Acolhimento de Primatas e Aves (PRIMAVES). The aim was to identify hierarchy and dominance behaviors through quantification and duration of conducts, comparing the data with information already described for Alouatta genus. A total of 172 hours of observations were carried out, and from the quantification of grooming (non-agonistic social category), roaring (agonistic social category), vigilance (alert category) and eating (feeding category), both groups showed an evident dominance between the individuals, with the youthful males performing a certain degree of spatial centralization, showed through roaring and vigilance behaviors. The females are active in vigilance and grooming, showing an important role in the maintenance of social stability, providing to the group that lives in captivity an appeasing relation between the individuals.

Ocorrência de Trypanoxyuris (Trypanoxyuris) minutus (Schneider, 1866) (Nematoda, Oxyuridae) em Alouatta guariba clamitans Cabrera, 1940 (Primates, Atelidae) em Minas Gerais, Brasil / Occurrence of Trypanoxyuris (Trypanoxyuris) minutus (Schneider, 1866) (Nematoda, Oxyuridae) in Alouatta guariba clamitans Cabrera, 1940 (Primates, Atelidae) in Minas Gerais, Brazil

Este trabalho teve como objetivo registrar a ocorrência de Trypanoxyuris (Trypanoxyuris) minutus em Alouatta guariba clamitans no estado de Minas Gerais, Brasil, e fornecer dados quantitativos sobre as infrapopulações desses nematoides, além de dados morfológicos e biométricos de machos e fêmeas. Dois espécimes de A. guariba clamitans, mortos acidentalmente, foram necropsiados, visando aos estudos parasitológicos. Apenas o intestino grosso e o ceco estavam parasitados por T. (T.) minutus. A intensidade do parasitismo no intestino grosso foi de 6650 parasitos e a densidade de 2,6 parasitos/cm³ de intestino. No ceco, observou-se uma intensidade média de 6.753 ± 490,73 parasitos, com uma densidade média de 6,23 ± 5,13 parasitos/cm³. O presente trabalho fornece informações sobre a biometria dos adultos de T. (T.) minutus nessa espécie de hospedeiro, e se constitui no primeiro registro dessa espécie em A. guariba clamitans em Minas Gerais, Brasil.

This study aims to register the occurrence of Trypanoxyuris (Trypanoxyuris) minutus in Alouatta guariba clamitans, in Minas Gerais state, Brazil. Two specimens of A. guariba clamitans, died accidentally, have been necropsied for parasito-logical studies. Only the large intestine and caecum were infected by T. minutus. The parasitism intensity was 6650 parasites and the density was 2.6 parasites/cm³ of large intestine. In the caecum, the mean intensity was 6753 ± 490.73 parasites, with mean density of 6.23 ± 5.13 parasites/cm³. The present study supplies information on adult nematodes biometry and this is the first record of T. (T.) minutus in A. guariba clamitans from Minas Gerais State, Brazil.

Associação de cetamina S(+) e midazolam pelo método convencional de cálculo e pela extrapolação alométrica em bugios-ruivo (Alouatta guariba clamitans): resposta clínica e cardiorrespiratória / S(+) ketamine and midazolam association by the conventional method of calculation and allometric extrapolation in red howler monkeys (Alouatta guariba clamitans): clinical and cardiopulmonary response

O objetivo deste estudo foi avaliar o protocolo de contenção química com cetamina S(+) e midazolam em bugios-ruivos, comparando o cálculo de doses pelo método convencional e o método de extrapolação alométrica. Foram utilizados 12 macacos bugios (Alouatta guariba clamitans) hígidos, com peso médio de 4,84±0,97kg, de ambos os sexos. Após jejum alimentar de 12 horas e hídrico de seis horas, realizou-se contenção física manual e aferiram-se os seguintes parâmetros: frequência cardíaca (FC), frequência respiratória (f), tempo de preenchimento capilar (TPC), temperatura retal (TR), pressão arterial sistólica não invasiva (PANI) e valores de hemogasometria arterial. Posteriormente, os animais foram alocados em dois grupos: GC (Grupo Convencional, n=06), os quais receberam cetamina S(+) (5mg kg-1) e midazolam (0,5mg kg-1), pela via intramuscular, com doses calculadas pelo método convencional; e GA (Grupo Alometria, n=06), os quais receberam o mesmo protocolo, pela mesma via, utilizando-se as doses calculadas pelo método de extrapolação alométrica. Os parâmetros descritos foram mensurados novamente nos seguintes momentos: M5, M10, M20 e M30 (cinco, 10, 20 e 30 minutos após a administração dos fármacos, respectivamente). Também foram avaliados: qualidade de miorrelaxamento, reflexo podal e caudal, pinçamento interdigital, tempo para indução de decúbito, tempo hábil de sedação, qualidade de sedação, e tempo e qualidade de recuperação. O GA apresentou menor tempo para indução ao decúbito, maior grau e tempo de sedação, bem como redução significativa da FC e PANI de M5 até M30, quando comparado ao GC. Conclui-se que o grupo no qual o cálculo de dose foi realizado por meio da alometria (GA) apresentou melhor grau de relaxamento muscular e sedação, sem produzir depressão cardiorrespiratória significativa.

The aim of this study was to evaluate a protocol of chemical restraint comparing the conventional method of calculation (weight dose) and allometric extrapolation. Twelve healthy red howler monkeys (Alouatta guariba clamitans), average weight 4.84±0.97kg, male and female, were used for this study. After a 12-hour period of food restriction and 6 hours of water restriction, the animals were physically restraint and the following parameters were measured: heart rate (HR), respiratory rate (RR), capillary refill time (CRT), rectal temperature (RT), non invasive systolic arterial pressure (NISAP) and arterial blood gases analysis. The animals were distributed into two groups: CG (Conventional Group, n=6), in which the animals received S(+) ketamine (5mg kg-1) and midazolam (0.5mg kg-1), by intramuscular (IM) injection; and AG (Allometry Group, n=6), in which the animals also received S(+) ketamine and midazolan IM, but the doses were calculated by allometric extrapolation. Parameters were evaluated at the following moments: M5, M10, M20 and M30 (5, 10, 20 and 30 minutes after IM injection, respectively). Muscle relaxation, pedal and caudal reflexes, interdigital pinch, recumbency time, sedation's quality and duration, and recovery time and its quality were also evaluated. The AG had a faster time for recumbency, higher period and quality of sedation, and a significantly reduction on HR and SAP from M5 to M30 when compared to CG. It was concluded that allometric extrapolation presented a better muscle relaxation and sedation without significant cardiorespiratory depression.